隨著醫(yī)療器械生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范的實施，對無菌和植入類醫(yī)療器械的微生物實驗室已做出相應(yīng)要求，其中《醫(yī)療器械生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范無菌醫(yī)療器械實施細(xì)則》和《醫(yī)療器械生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范植入性醫(yī)療器械實施細(xì)則》中第八章**和測量規(guī)定：生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)當(dāng)建立符合要求并與生產(chǎn)產(chǎn)品相適應(yīng)的無菌檢驗室。但實際還包括陽性對照室、微生物限度檢查室等，總體稱之為微生物實驗室更加符合實際。目前醫(yī)療器械微生物實驗室法規(guī)要求起步晚，依據(jù)不夠細(xì)化，加之產(chǎn)品的復(fù)雜性，因此微生物實驗室的規(guī)范化設(shè)計并不成熟，對微生物實驗室的設(shè)計和布局進(jìn)行初步探討。  

1.微生物實驗室功能醫(yī)療器械的檢驗通常分為物理性能、化學(xué)性能、生物性能檢驗。理化檢驗需要設(shè)置理化檢驗室或在相應(yīng)工位設(shè)檢驗裝置；生物性能檢驗，對其中的生物學(xué)評價檢驗，企業(yè)一般不設(shè)檢驗室，而是委托檢測機構(gòu)進(jìn)行檢測，而微生物檢測按法規(guī)要求需自行建立微生物檢驗室。微生物實驗室應(yīng)實現(xiàn)以下功能： 

(1) 按照該產(chǎn)品的標(biāo)準(zhǔn)要求(引用GB/T14233.2方法或藥典方法)，對產(chǎn)品進(jìn)行無菌檢驗； 

(2)對潔凈環(huán)境(空氣、水、工藝用氣、臺面、手)進(jìn)行微生物檢驗； 

(3)對原材料、半成品、成品的初始污染菌檢測； 

(4)部分含藥的醫(yī)療器械還需滿足藥品檢驗需要(無菌、微生物限度、抗生素效價的微生物檢定)，如含藥敷料、含有慶大霉素的骨水泥、藥物涂層產(chǎn)品等；此外，部分產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定需要進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查(如注射器、輸液器等一次性使用無菌醫(yī)療器械產(chǎn)品，氧合器、血液透析器、冠脈支架系統(tǒng)等部分人工器官和植入物產(chǎn)品)該類檢查雖不是微生物檢查，但對檢查環(huán)境有較高的要求的，操作間應(yīng)設(shè)有紫外線燈，并有控制溫度、濕度的設(shè)備。應(yīng)有書面操作規(guī)程，并有防止污染的措施。  

2. 微生物實驗室設(shè)計要求

    微生物實驗室設(shè)計包括以下幾個方面：人員，培養(yǎng)基，菌種，設(shè)備，實驗室的布局和運行，器具及工作服洗滌、存放要求，更衣流程。 

2.1人員從事微生物實驗工作的人員應(yīng)具備微生物學(xué)或相近專業(yè)知識的教育背景。檢驗人員數(shù)量和素質(zhì)應(yīng)能滿足檢驗工作的需要。檢驗人員必須熟悉相關(guān)檢測方法、程序、檢測目的和結(jié)果評價。保證人員在上崗前接受勝任工作所必須的設(shè)備操作、微生物檢驗技術(shù)和實驗室生物安全等方面的培訓(xùn)，經(jīng)考核合格后方可上崗。 

2.2培養(yǎng)基培養(yǎng)基質(zhì)量穩(wěn)定可靠，有良好的促菌生長能力，具備適宜的滅菌方式，在規(guī)定的條件和環(huán)境下貯藏，通過不同菌種的接種試驗并觀察生長狀態(tài)，進(jìn)行靈敏度試驗。 

2.3菌種標(biāo)準(zhǔn)菌株的復(fù)活和傳代應(yīng)當(dāng)滿足藥典要求。試驗過程中，生物樣本是最敏感的，它們的活性依賴于合適的試驗操作和存儲條件。實驗室菌種的處理和保藏的程序應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)化，盡可能減少菌種污染和生長特性的改變。工作菌株的傳代次數(shù)應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格控制，不得超過5代(從菌種保藏機構(gòu)獲得的標(biāo)準(zhǔn)菌株為第0代)，防止過度的傳代增加菌種變異的風(fēng)險。 

2.4設(shè)備完成相應(yīng)的檢定、校準(zhǔn)、驗證、確認(rèn)其性能。對于一些容易造成微生物污染的儀器設(shè)備如水浴鍋、培養(yǎng)箱、冰箱和生物安全柜等應(yīng)定期清潔和消毒。 

2.5無菌檢查室如果企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)引用藥典要求，企業(yè)應(yīng)當(dāng)按照2010版藥典中(附錄ⅪH)無菌檢查法要求設(shè)置潔凈間，無菌檢查應(yīng)在潔凈度10000級下的局部潔凈度100級的單向流空區(qū)域內(nèi)或隔離系統(tǒng)中進(jìn)行，其全部過程應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影響供試品微生物的檢出。單向流空氣區(qū)、工作臺面及環(huán)境應(yīng)定期按《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室(區(qū))懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法》的現(xiàn)行**標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行潔凈度驗證。如企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中引用的GB/T 14233.2的無菌試驗方法，還應(yīng)滿足以下要求：無菌室操作臺或超凈工作臺局部應(yīng)符合潔凈度100級單向流空氣區(qū)域要求。無菌室在消毒處理完畢后，應(yīng)檢查空氣中的菌落數(shù)，方法如下：取直徑約90mm培養(yǎng)皿，無菌操作注入融化的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基約20 mL，在30 C~35 C培養(yǎng)48h證明無菌后，取3只培養(yǎng)皿在無菌室操作臺或超凈工作臺平均位置打開上蓋，暴露30 min后蓋好置30 C~35 C培養(yǎng)48h后取出檢查。3只培養(yǎng)皿上生長的菌落數(shù)平均應(yīng)不超過1個。 

2.6微生物限度檢查室微生物限度檢查法(附錄ⅪJ)應(yīng)在潔凈度10000級下的局部潔凈度100級的單向流空氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行。檢驗室單向流空氣區(qū)域、工作臺面及環(huán)境應(yīng)定期按《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室(區(qū))懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法》的現(xiàn)行**標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行潔凈度驗證。 

2.7陽性對照(接種)室微生物檢驗需要對標(biāo)準(zhǔn)菌種、檢測菌種進(jìn)行各種操作。如用于培養(yǎng)基的靈敏度檢查、無菌檢查和微生物限度檢查方法的驗證、陽性對照、抗生素效價的微生物檢定時需要的菌種及菌懸液制備、傳代轉(zhuǎn)接種。這些操作要處理微生物菌種，部分菌種為條件致病菌，特殊情況要用到病原菌。  

    如培養(yǎng)基靈敏度檢查和無菌檢查方法驗證試驗用到菌種為：金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉。無抑菌作用供試品陽性對照試驗菌種為金黃色葡萄球菌，有抑菌作用供試品對照試驗菌種為大腸埃希菌、生孢梭菌、白色念珠菌。(其實驗室安全級別見表1)雖然醫(yī)療器械陽性對照(接種)室設(shè)計沒有專門的**或行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，但參考上述衛(wèi)生部文件要求，并根據(jù)《實驗室生物安全通用要求》GB19489–2008規(guī)定，危害等級為Ⅱ定義為能引起人或動物發(fā)病，但一般情況下對健康工作者、群體、家畜或環(huán)境不會引起嚴(yán)重危害的病原體，實驗室感染不導(dǎo)致嚴(yán)重疾病，具備有效治療和預(yù)防措施，并且傳播風(fēng)險有限。對應(yīng)危害等級Ⅱ應(yīng)采用BSL—2實驗室，并配備生物安全柜。  

    一般情況(對應(yīng)大部分醫(yī)療器械品種)：鑒于常規(guī)陽性對照(接種)，部分種類菌種在人體抵抗力低下(非健康狀態(tài))時有致病性，微生物實驗室有一定的生物安全風(fēng)險，建議有條件的企業(yè)盡可能使用生物安全柜，避免對操作者造成危害。特殊情況(對應(yīng)少部分醫(yī)療器械品種)：屬于如下情況時應(yīng)遵循不低于BSL–2實驗室設(shè)置，須有相應(yīng)級別生物安全柜： 

(1) 某些含藥類醫(yī)療器械，尤其是具有抗菌、抑菌功能的，其陽性對照(試驗)操作可能產(chǎn)生耐藥性菌種的； 

(2)對含藥(尤其是抗生素)類醫(yī)療器械滅菌能力進(jìn)行效能驗證需致病性、感染性菌株的； 

(3)陽性對照(試驗)菌種操作中有噴灑、溢出、甩濺可能的。容易產(chǎn)生氣溶膠的行為(對液體或半流體進(jìn)行搖動、傾注或攪拌操作時，將液體滴加到固體表面上或另一種液體中時，在對瓊脂板劃線接種、用吸管接種細(xì)胞培養(yǎng)瓶)。對陽性對照(試驗)室環(huán)境背景，藥典未作具體規(guī)定。參考《生物安全實驗室建筑規(guī)范》，二級生物安全實驗室可不設(shè)空調(diào)凈化系統(tǒng)，也可根據(jù)需要設(shè)置帶循環(huán)回風(fēng)的空調(diào)凈化系統(tǒng)。但為了保護(hù)實驗環(huán)境，延長生物安全柜的使用壽命，建議采用機械通風(fēng)，并加裝過濾裝置。排風(fēng)應(yīng)經(jīng)過處理后直排。陽性對照室應(yīng)保持相對負(fù)壓，這里需要強調(diào)的是“相對”二字，如陽性間相對臨室為負(fù)壓，但對大氣可能實為正壓或負(fù)壓。在正壓的情況下，與非潔凈區(qū)或室外大氣間的靜壓差不宜過大，以避免陽性間密閉性意外遭破壞時污染物迅速擴散。 

2.8培養(yǎng)室用于放置微生物生長的細(xì)菌培養(yǎng)箱、真菌培養(yǎng)箱和菌種保存的冰箱。室內(nèi)應(yīng)保持清潔，不得堆放雜物。大多數(shù)企業(yè)將其設(shè)置為一般環(huán)境，但應(yīng)保持潔凈，注意避免使用強效、揮發(fā)性、噴霧型的消毒劑，防止影響微生物的生長。表1.序號菌種名稱危害程度分類用于樣本檢測用于非感染性材料的實驗1金黃色葡萄球菌第三類[1]BSL-2 BSL-12銅綠假單胞菌第三類[1]BSL-2 BSL-13白色念珠菌第三類BSL-2 BSL-14大腸埃希菌第三類BSL-2 BSL-15枯草芽孢桿菌第四類[2]BSL-1 BSL-16生孢梭菌第四類[3]BSL-1 BSL-17黑曲霉第四類BSL-1 BSL-1 

注解： 

1、BSL-2，BSL-1代表不同生物安全級別的實驗室[1] 

2、樣本檢測的定義為：包括樣本的病原菌分離純化、藥物敏感性實驗、生化鑒定、免疫學(xué)實驗、PCR核酸提取、涂片、顯微觀察等初步檢測活動。 

3、非感染性材料的實驗：如不含致病性活菌材料的分子生物學(xué)、免疫學(xué)等實驗。 

2.9準(zhǔn)備室準(zhǔn)備室即試液及培養(yǎng)基配制、滅菌區(qū)域，陽性對照室器皿洗滌、烘干、滅菌、實驗室用品準(zhǔn)備等沒有特殊要求的功能間，可為一般清潔環(huán)境。 

2.10細(xì)菌內(nèi)毒素檢查室適用于一次性使用無菌醫(yī)療器械及產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)中要求進(jìn)行熱原檢查的產(chǎn)品(一次性使用注射器、輸液器、輸液泵等)。利用鱟試劑與細(xì)菌內(nèi)毒素產(chǎn)生凝集反應(yīng)的機理，以判定供試品中細(xì)菌內(nèi)毒素限量是否符合規(guī)定。由于此種方法不能檢定材料致熱，對于非革蘭陰性菌不敏感，故熱原試驗的仲裁法應(yīng)為家兔法。進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素含量測定實驗所需的器皿需經(jīng)處理，去除可能存在的外源性干擾，耐熱器皿常用干熱滅菌法(250 C、30分鐘以上)去除，也可采用其他確認(rèn)不干擾細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的適宜方法。若使用塑料器械，應(yīng)選用標(biāo)明無內(nèi)毒素并且對試驗無干擾的器械。試驗過程應(yīng)能防止微生物和內(nèi)毒素污染，目前GB/T 14233.2標(biāo)準(zhǔn)中細(xì)菌內(nèi)毒素試驗要求需超凈工作臺，醫(yī)療器械法規(guī)和藥典未對背景環(huán)境要求做明確規(guī)定。 

2.11實驗室的布局和運行 

(1) 總體原則實驗室布局設(shè)計的基本原則是既要最大可能防止微生物的交叉污染，又要防止檢驗過程對環(huán)境和人員造成危害。應(yīng)充分考慮到微生物實驗室操作規(guī)范和試驗室安全的要求。通常，實驗室劃分成潔凈或無菌操作區(qū)域和活菌操作區(qū)域，同時根據(jù)試驗?zāi)康牟煌诳臻g或時間上有效分隔不相容或相互產(chǎn)生干擾的試驗活動，將交叉污染的風(fēng)險降到最低。根據(jù)相應(yīng)功能，無菌檢查室和微生物限度檢查室在設(shè)計上應(yīng)遵循《醫(yī)藥工業(yè)潔凈廠房設(shè)計規(guī)范》GB50457-2008，而陽性對照(試驗)室還應(yīng)部分參考《生物安全實驗室建筑規(guī)范》GB50346-2011規(guī)定。 

(2) **局規(guī)范性文件要求醫(yī)療器械生產(chǎn)企業(yè)的無菌檢測實驗室原則上應(yīng)設(shè)3間萬級下的局部百級潔凈室，用作無菌室、陽性對照室和微生物限度室。無菌檢測實驗室原則上應(yīng)當(dāng)和潔凈生產(chǎn)區(qū)分開設(shè)置，有獨立的區(qū)域、單獨的空調(diào)送風(fēng)系統(tǒng)和專用的人流物流通道及實驗準(zhǔn)備區(qū)等。 

(3) 三地省局具體規(guī)定(見表2)以上為三地省局對《醫(yī)療器械生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范(試行)》的三室設(shè)置的進(jìn)一步解釋和說明，比較三者同異，相同的是三室空調(diào)系統(tǒng)與產(chǎn)品生產(chǎn)區(qū)分開，無菌檢驗室與微生物限度室的環(huán)境背景，陽性對照室不應(yīng)利用回風(fēng)，陽性室不作背景的硬性要求。 

1、對于新建實驗室的：生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)分別建立萬級下局部百級的無菌檢驗室、微生物限度室和陽性對照室(包括人流、物流相對獨立) 

2、對于實驗室改造的：有較大難度的，無菌檢驗室、微生物限度室可共用(但應(yīng)進(jìn)行清場)[8]陽性對照室應(yīng)配備百級潔凈工作臺；如陽性對照室如處于非受控環(huán)境，應(yīng)提供驗證資料，并配備生物安全柜[8]上海陽性對照、無菌檢查、微生物限度檢查等實驗室應(yīng)當(dāng)分開設(shè)置。(考慮到原有部分企業(yè)的無菌檢查、微生物檢查實驗室是合用的，故在目前檢查中予以默認(rèn)。

    對新建和新改造的潔凈生產(chǎn)車間，則按上述標(biāo)準(zhǔn)檢查) 無菌檢查室、微生物限度檢查室應(yīng)為無菌潔凈室，其空氣潔凈度等級不應(yīng)低于10000級，并應(yīng)設(shè)置相應(yīng)的人員凈化和物料凈化設(shè)施。 

    上述實驗室的凈化空調(diào)系統(tǒng)應(yīng)與產(chǎn)品生產(chǎn)區(qū)分開。 

    陽性對照室不應(yīng)利用回風(fēng)，室內(nèi)空氣應(yīng)經(jīng)過濾后直接排至室外。(直接排至室外的氣體一般要設(shè)置空氣過濾處理裝置，以保護(hù)環(huán)境。