隨著醫(yī)療器械生產質量管理規(guī)范的實施，對無菌和植入類醫(yī)療器械的微生物實驗室已做出相應要求，其中《醫(yī)療器械生產質量管理規(guī)范無菌醫(yī)療器械實施細則》和《醫(yī)療器械生產質量管理規(guī)范植入性醫(yī)療器械實施細則》中第八章**和測量規(guī)定：生產企業(yè)應當建立符合要求并與生產產品相適應的無菌檢驗室。但實際還包括陽性對照室、微生物限度檢查室等，總體稱之為微生物實驗室更加符合實際。目前醫(yī)療器械微生物實驗室法規(guī)要求起步晚，依據不夠細化，加之產品的復雜性，因此微生物實驗室的規(guī)范化設計并不成熟，對微生物實驗室的設計和布局進行初步探討。  

1.微生物實驗室功能醫(yī)療器械的檢驗通常分為物理性能、化學性能、生物性能檢驗。理化檢驗需要設置理化檢驗室或在相應工位設檢驗裝置；生物性能檢驗，對其中的生物學評價檢驗，企業(yè)一般不設檢驗室，而是委托檢測機構進行檢測，而微生物檢測按法規(guī)要求需自行建立微生物檢驗室。微生物實驗室應實現以下功能： 

(1) 按照該產品的標準要求(引用GB/T14233.2方法或藥典方法)，對產品進行無菌檢驗； 

(2)對潔凈環(huán)境(空氣、水、工藝用氣、臺面、手)進行微生物檢驗； 

(3)對原材料、半成品、成品的初始污染菌檢測； 

(4)部分含藥的醫(yī)療器械還需滿足藥品檢驗需要(無菌、微生物限度、抗生素效價的微生物檢定)，如含藥敷料、含有慶大霉素的骨水泥、藥物涂層產品等；此外，部分產品標準規(guī)定需要進行細菌內毒素檢查(如注射器、輸液器等一次性使用無菌醫(yī)療器械產品，氧合器、血液透析器、冠脈支架系統等部分人工器官和植入物產品)該類檢查雖不是微生物檢查，但對檢查環(huán)境有較高的要求的，操作間應設有紫外線燈，并有控制溫度、濕度的設備。應有書面操作規(guī)程，并有防止污染的措施。  

2. 微生物實驗室設計要求

    微生物實驗室設計包括以下幾個方面：人員，培養(yǎng)基，菌種，設備，實驗室的布局和運行，器具及工作服洗滌、存放要求，更衣流程。 

2.1人員從事微生物實驗工作的人員應具備微生物學或相近專業(yè)知識的教育背景。檢驗人員數量和素質應能滿足檢驗工作的需要。檢驗人員必須熟悉相關檢測方法、程序、檢測目的和結果評價。保證人員在上崗前接受勝任工作所必須的設備操作、微生物檢驗技術和實驗室生物安全等方面的培訓，經考核合格后方可上崗。 

2.2培養(yǎng)基培養(yǎng)基質量穩(wěn)定可靠，有良好的促菌生長能力，具備適宜的滅菌方式，在規(guī)定的條件和環(huán)境下貯藏，通過不同菌種的接種試驗并觀察生長狀態(tài)，進行靈敏度試驗。 

2.3菌種標準菌株的復活和傳代應當滿足藥典要求。試驗過程中，生物樣本是最敏感的，它們的活性依賴于合適的試驗操作和存儲條件。實驗室菌種的處理和保藏的程序應標準化，盡可能減少菌種污染和生長特性的改變。工作菌株的傳代次數應當嚴格控制，不得超過5代(從菌種保藏機構獲得的標準菌株為第0代)，防止過度的傳代增加菌種變異的風險。 

2.4設備完成相應的檢定、校準、驗證、確認其性能。對于一些容易造成微生物污染的儀器設備如水浴鍋、培養(yǎng)箱、冰箱和生物安全柜等應定期清潔和消毒。 

2.5無菌檢查室如果企業(yè)標準引用藥典要求，企業(yè)應當按照2010版藥典中(附錄ⅪH)無菌檢查法要求設置潔凈間，無菌檢查應在潔凈度10000級下的局部潔凈度100級的單向流空區(qū)域內或隔離系統中進行，其全部過程應當嚴格遵守無菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影響供試品微生物的檢出。單向流空氣區(qū)、工作臺面及環(huán)境應定期按《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室(區(qū))懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法》的現行**標準進行潔凈度驗證。如企業(yè)標準中引用的GB/T 14233.2的無菌試驗方法，還應滿足以下要求：無菌室操作臺或超凈工作臺局部應符合潔凈度100級單向流空氣區(qū)域要求。無菌室在消毒處理完畢后，應檢查空氣中的菌落數，方法如下：取直徑約90mm培養(yǎng)皿，無菌操作注入融化的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基約20 mL，在30 C~35 C培養(yǎng)48h證明無菌后，取3只培養(yǎng)皿在無菌室操作臺或超凈工作臺平均位置打開上蓋，暴露30 min后蓋好置30 C~35 C培養(yǎng)48h后取出檢查。3只培養(yǎng)皿上生長的菌落數平均應不超過1個。 

2.6微生物限度檢查室微生物限度檢查法(附錄ⅪJ)應在潔凈度10000級下的局部潔凈度100級的單向流空氣區(qū)域內進行。檢驗室單向流空氣區(qū)域、工作臺面及環(huán)境應定期按《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室(區(qū))懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法》的現行**標準進行潔凈度驗證。 

2.7陽性對照(接種)室微生物檢驗需要對標準菌種、檢測菌種進行各種操作。如用于培養(yǎng)基的靈敏度檢查、無菌檢查和微生物限度檢查方法的驗證、陽性對照、抗生素效價的微生物檢定時需要的菌種及菌懸液制備、傳代轉接種。這些操作要處理微生物菌種，部分菌種為條件致病菌，特殊情況要用到病原菌。  

    如培養(yǎng)基靈敏度檢查和無菌檢查方法驗證試驗用到菌種為：金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉。無抑菌作用供試品陽性對照試驗菌種為金黃色葡萄球菌，有抑菌作用供試品對照試驗菌種為大腸埃希菌、生孢梭菌、白色念珠菌。(其實驗室安全級別見表1)雖然醫(yī)療器械陽性對照(接種)室設計沒有專門的**或行業(yè)標準，但參考上述衛(wèi)生部文件要求，并根據《實驗室生物安全通用要求》GB19489–2008規(guī)定，危害等級為Ⅱ定義為能引起人或動物發(fā)病，但一般情況下對健康工作者、群體、家畜或環(huán)境不會引起嚴重危害的病原體，實驗室感染不導致嚴重疾病，具備有效治療和預防措施，并且傳播風險有限。對應危害等級Ⅱ應采用BSL—2實驗室，并配備生物安全柜。  

    一般情況(對應大部分醫(yī)療器械品種)：鑒于常規(guī)陽性對照(接種)，部分種類菌種在人體抵抗力低下(非健康狀態(tài))時有致病性，微生物實驗室有一定的生物安全風險，建議有條件的企業(yè)盡可能使用生物安全柜，避免對操作者造成危害。特殊情況(對應少部分醫(yī)療器械品種)：屬于如下情況時應遵循不低于BSL–2實驗室設置，須有相應級別生物安全柜： 

(1) 某些含藥類醫(yī)療器械，尤其是具有抗菌、抑菌功能的，其陽性對照(試驗)操作可能產生耐藥性菌種的； 

(2)對含藥(尤其是抗生素)類醫(yī)療器械滅菌能力進行效能驗證需致病性、感染性菌株的； 

(3)陽性對照(試驗)菌種操作中有噴灑、溢出、甩濺可能的。容易產生氣溶膠的行為(對液體或半流體進行搖動、傾注或攪拌操作時，將液體滴加到固體表面上或另一種液體中時，在對瓊脂板劃線接種、用吸管接種細胞培養(yǎng)瓶)。對陽性對照(試驗)室環(huán)境背景，藥典未作具體規(guī)定。參考《生物安全實驗室建筑規(guī)范》，二級生物安全實驗室可不設空調凈化系統，也可根據需要設置帶循環(huán)回風的空調凈化系統。但為了保護實驗環(huán)境，延長生物安全柜的使用壽命，建議采用機械通風，并加裝過濾裝置。排風應經過處理后直排。陽性對照室應保持相對負壓，這里需要強調的是“相對”二字，如陽性間相對臨室為負壓，但對大氣可能實為正壓或負壓。在正壓的情況下，與非潔凈區(qū)或室外大氣間的靜壓差不宜過大，以避免陽性間密閉性意外遭破壞時污染物迅速擴散。 

2.8培養(yǎng)室用于放置微生物生長的細菌培養(yǎng)箱、真菌培養(yǎng)箱和菌種保存的冰箱。室內應保持清潔，不得堆放雜物。大多數企業(yè)將其設置為一般環(huán)境，但應保持潔凈，注意避免使用強效、揮發(fā)性、噴霧型的消毒劑，防止影響微生物的生長。表1.序號菌種名稱危害程度分類用于樣本檢測用于非感染性材料的實驗1金黃色葡萄球菌第三類[1]BSL-2 BSL-12銅綠假單胞菌第三類[1]BSL-2 BSL-13白色念珠菌第三類BSL-2 BSL-14大腸埃希菌第三類BSL-2 BSL-15枯草芽孢桿菌第四類[2]BSL-1 BSL-16生孢梭菌第四類[3]BSL-1 BSL-17黑曲霉第四類BSL-1 BSL-1 

注解： 

1、BSL-2，BSL-1代表不同生物安全級別的實驗室[1] 

2、樣本檢測的定義為：包括樣本的病原菌分離純化、藥物敏感性實驗、生化鑒定、免疫學實驗、PCR核酸提取、涂片、顯微觀察等初步檢測活動。 

3、非感染性材料的實驗：如不含致病性活菌材料的分子生物學、免疫學等實驗。 

2.9準備室準備室即試液及培養(yǎng)基配制、滅菌區(qū)域，陽性對照室器皿洗滌、烘干、滅菌、實驗室用品準備等沒有特殊要求的功能間，可為一般清潔環(huán)境。 

2.10細菌內毒素檢查室適用于一次性使用無菌醫(yī)療器械及產品標準中要求進行熱原檢查的產品(一次性使用注射器、輸液器、輸液泵等)。利用鱟試劑與細菌內毒素產生凝集反應的機理，以判定供試品中細菌內毒素限量是否符合規(guī)定。由于此種方法不能檢定材料致熱，對于非革蘭陰性菌不敏感，故熱原試驗的仲裁法應為家兔法。進行細菌內毒素含量測定實驗所需的器皿需經處理，去除可能存在的外源性干擾，耐熱器皿常用干熱滅菌法(250 C、30分鐘以上)去除，也可采用其他確認不干擾細菌內毒素檢查的適宜方法。若使用塑料器械，應選用標明無內毒素并且對試驗無干擾的器械。試驗過程應能防止微生物和內毒素污染，目前GB/T 14233.2標準中細菌內毒素試驗要求需超凈工作臺，醫(yī)療器械法規(guī)和藥典未對背景環(huán)境要求做明確規(guī)定。 

2.11實驗室的布局和運行 

(1) 總體原則實驗室布局設計的基本原則是既要最大可能防止微生物的交叉污染，又要防止檢驗過程對環(huán)境和人員造成危害。應充分考慮到微生物實驗室操作規(guī)范和試驗室安全的要求。通常，實驗室劃分成潔凈或無菌操作區(qū)域和活菌操作區(qū)域，同時根據試驗目的不同，在空間或時間上有效分隔不相容或相互產生干擾的試驗活動，將交叉污染的風險降到最低。根據相應功能，無菌檢查室和微生物限度檢查室在設計上應遵循《醫(yī)藥工業(yè)潔凈廠房設計規(guī)范》GB50457-2008，而陽性對照(試驗)室還應部分參考《生物安全實驗室建筑規(guī)范》GB50346-2011規(guī)定。 

(2) **局規(guī)范性文件要求醫(yī)療器械生產企業(yè)的無菌檢測實驗室原則上應設3間萬級下的局部百級潔凈室，用作無菌室、陽性對照室和微生物限度室。無菌檢測實驗室原則上應當和潔凈生產區(qū)分開設置，有獨立的區(qū)域、單獨的空調送風系統和專用的人流物流通道及實驗準備區(qū)等。 

(3) 三地省局具體規(guī)定(見表2)以上為三地省局對《醫(yī)療器械生產質量管理規(guī)范(試行)》的三室設置的進一步解釋和說明，比較三者同異，相同的是三室空調系統與產品生產區(qū)分開，無菌檢驗室與微生物限度室的環(huán)境背景，陽性對照室不應利用回風，陽性室不作背景的硬性要求。 

1、對于新建實驗室的：生產企業(yè)應分別建立萬級下局部百級的無菌檢驗室、微生物限度室和陽性對照室(包括人流、物流相對獨立) 

2、對于實驗室改造的：有較大難度的，無菌檢驗室、微生物限度室可共用(但應進行清場)[8]陽性對照室應配備百級潔凈工作臺；如陽性對照室如處于非受控環(huán)境，應提供驗證資料，并配備生物安全柜[8]上海陽性對照、無菌檢查、微生物限度檢查等實驗室應當分開設置。(考慮到原有部分企業(yè)的無菌檢查、微生物檢查實驗室是合用的，故在目前檢查中予以默認。

    對新建和新改造的潔凈生產車間，則按上述標準檢查) 無菌檢查室、微生物限度檢查室應為無菌潔凈室，其空氣潔凈度等級不應低于10000級，并應設置相應的人員凈化和物料凈化設施。 

    上述實驗室的凈化空調系統應與產品生產區(qū)分開。 

    陽性對照室不應利用回風，室內空氣應經過濾后直接排至室外。(直接排至室外的氣體一般要設置空氣過濾處理裝置，以保護環(huán)境。